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端粒長(zhǎng)度檢測(cè)

更新時(shí)間:2025-10-28

簡(jiǎn)要描述:

端粒長(zhǎng)度檢測(cè)是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列,端粒長(zhǎng)度的變化,與衰老、癌癥、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的經(jīng)典技術(shù),用時(shí)短,操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,適用于批量樣本檢測(cè)。

  端粒長(zhǎng)度檢測(cè)是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列,端粒長(zhǎng)度的變化,與衰老、癌癥、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的經(jīng)典技術(shù),用時(shí)短,操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,適用于批量樣本檢測(cè)。

  本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光 qPCR(SYRBgreen+VIC)檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度,檢測(cè)對(duì)象為血液、口腔拭子或細(xì)胞DNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn)。
  1. 穩(wěn)定:全程閉管操作,無(wú)交叉污染。
  2. 可靠:端粒與內(nèi)參單管檢測(cè),減少孔間干擾。
  內(nèi)參基因?yàn)槎嗫截悾c端粒量差降低。
  3. 方便:操作簡(jiǎn)單,無(wú)需電泳步驟。
  4. 定量: △CT 值,可定量檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度。
  端粒長(zhǎng)度檢測(cè)是一種相對(duì)簡(jiǎn)單的檢測(cè),不需要大量起始 DNA(約 50 ng)。通過(guò)測(cè)量端粒信號(hào) ( T ) 與參考單拷貝基因信號(hào) ( S ),計(jì)算T / S比率,該比率與平均 TL (Telomere Length,端粒長(zhǎng)度)成正比,因此可用于確定相對(duì) TL。由于該技術(shù)的性質(zhì)可以應(yīng)用于高通量檢測(cè),因此被廣泛用于大規(guī)模人群研究。然而,由于 Q-PCR 僅提供相對(duì)定量,因此數(shù)據(jù)通常不會(huì)以kb形式的絕對(duì)端粒長(zhǎng)度呈現(xiàn),除非與具有由另一種方法確定的平均 TL 的參考細(xì)胞系進(jìn)行比較。有研究顯示此方法的測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)可能高于 10% 。而且,由于使用了不同的單拷貝基因,不同實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果可能存在很大差異。此外,Q-PCR 不提供有關(guān)最短端粒的信息。最后,用于 TL 測(cè)量的 Q-PCR 可能不適用于癌癥研究,其中的內(nèi)參單拷貝基因可能由于非整倍性而被復(fù)制或丟失。因此,Q-PCR 的適用性?xún)H限于正常二倍體和核型穩(wěn)定的樣品。
  端粒是在所有脊椎動(dòng)物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n序列。端粒的3'末端單鏈懸垂侵入雙鏈 DNA,形成 T 環(huán),這也導(dǎo)致鏈位移,產(chǎn)生單鏈端粒D-環(huán)。T 環(huán)是端粒的特殊結(jié)構(gòu),其與端粒保護(hù)蛋白Shelterin復(fù)合體直接或間接結(jié)合,保護(hù)染色體末端不被識(shí)別為 DNA 雙鏈斷裂。
  端粒是真核細(xì)胞染色體末端由重復(fù)性的dna序列和特殊的端粒結(jié)合蛋白所組成的一段特殊結(jié)構(gòu),其中脊椎動(dòng)物的端粒由富含g的短雙鏈重復(fù)序列ttaggg串聯(lián)組成。端粒能夠防止染色體末端的降解、融合和重排,從而維持染色體的獨(dú)立性、完整性和穩(wěn)定性。雖然端粒不具備編碼功能,卻被科學(xué)家稱(chēng)為“生命的時(shí)鐘",因?yàn)槎肆5拈L(zhǎng)度和穩(wěn)定性控制著細(xì)胞的壽命,并與細(xì)胞的癌變和衰老密切相關(guān)。
  在正常人類(lèi)體細(xì)胞中,端粒的長(zhǎng)度會(huì)隨著細(xì)胞分裂而逐漸縮短,細(xì)胞每分裂一次,端粒長(zhǎng)度縮短一截,損失20~30個(gè)核苷酸,當(dāng)端??s短到一定程度時(shí),會(huì)誘導(dǎo)核蛋白結(jié)構(gòu)的缺失,觸發(fā)復(fù)制性衰老,出現(xiàn)細(xì)胞增殖減慢、生長(zhǎng)停滯、干性減退、喪失分化能力等現(xiàn)象。同時(shí),縮短的端粒上某些端粒特殊結(jié)合蛋白的丟失還會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞將端粒末端錯(cuò)誤識(shí)別為dna斷裂位點(diǎn),從而啟動(dòng)dna修復(fù)功能,導(dǎo)致短端粒染色體之間的末端融合,染色體的融合會(huì)造成細(xì)胞有絲分裂異常,細(xì)胞周期停滯,進(jìn)而引發(fā)由p53蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
  此外,p53等基因突變導(dǎo)致細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)缺陷的細(xì)胞會(huì)躍過(guò)復(fù)制性衰老,持續(xù)分裂最終進(jìn)入危機(jī)期,這個(gè)時(shí)期極少數(shù)細(xì)胞表達(dá)端粒酶,激活端粒酶活性,修復(fù)并維持細(xì)胞端粒長(zhǎng)度,使得細(xì)胞永生化為癌細(xì)胞。在諸如直腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等90%癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)端粒過(guò)度縮短和端粒酶活性。端粒異常導(dǎo)致的疾病還包括白血病、再生障礙性貧血、骨髓增生異常和先天性角化不良等。端粒在人類(lèi)的衰老與疾病的發(fā)生進(jìn)程中扮演著極其重要的角色,端粒重復(fù)序列的長(zhǎng)度變化決定著細(xì)胞的命運(yùn),因此端粒長(zhǎng)度檢測(cè)是端粒生物學(xué)研究中的重要實(shí)驗(yàn)方法。
  此外,端粒長(zhǎng)度檢測(cè)在衰老疾病和腫瘤中也具有重要的診斷價(jià)值。由于種屬差異,人類(lèi)染色體的端粒長(zhǎng)度(雙鏈區(qū)長(zhǎng)度一般在0.5~20kb)遠(yuǎn)小于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室模型生物;且不同個(gè)體不同細(xì)胞中的端粒縮短程度不一樣,細(xì)胞內(nèi)不同染色體的端粒縮短程度也不一樣;而長(zhǎng)度小于等于3kb的端粒被定義為短端粒,最短的端粒而非平均端粒長(zhǎng)度在端粒功能喪失,誘發(fā)dna損傷和限制細(xì)胞存活中扮演重要角色。因此,亟需一種能夠在單個(gè)染色體水平精確、簡(jiǎn)單、快速、高通量地檢測(cè)人類(lèi)端粒長(zhǎng)度和短端粒比率的方法。
  在端粒相關(guān)遺傳疾病的發(fā)展過(guò)程中,當(dāng)端粒較短時(shí)會(huì)導(dǎo)致疾病早發(fā) 。隨著研究的不斷深入,人們也越來(lái)越認(rèn)識(shí)到生活方式因素,如肥胖、吸煙、缺乏運(yùn)動(dòng)和慢性壓力等會(huì)影響循環(huán)外周血白細(xì)胞中的端粒長(zhǎng)度。另外,導(dǎo)致端粒功能障礙的端??s短與許多年齡相關(guān)疾病有關(guān),如不孕癥、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、癌癥、心血管和神經(jīng)退行性疾病等。因此,可以預(yù)測(cè)這些疾病發(fā)生的穩(wěn)定且可重復(fù)的端粒長(zhǎng)度測(cè)定方法是十分重要的。
  然而,基本上所有已發(fā)表的端粒相關(guān)疾病的大規(guī)模人群研究本質(zhì)上都是相關(guān)性研究,只提供了端粒平均長(zhǎng)度或相對(duì)端粒長(zhǎng)度的信息。有大量證據(jù)表明,觸發(fā) DNA 損傷反應(yīng)的是最短的端粒,從而導(dǎo)致哺乳動(dòng)物的復(fù)制性衰老。最短端粒的長(zhǎng)度是決定細(xì)胞命運(yùn)和衰老開(kāi)始的關(guān)鍵生物標(biāo)志物,但可檢測(cè)短端粒的方法卻費(fèi)時(shí)費(fèi)力,不能實(shí)現(xiàn)高通量要求。故現(xiàn)有的端粒長(zhǎng)度測(cè)定方法不分優(yōu)劣,各有千秋。
  端粒長(zhǎng)度的異常改變或許在疾病早期便會(huì)發(fā)生,端粒長(zhǎng)度在幾十年后可能會(huì)成為某些疾病的早期篩查指標(biāo),甚至輔助診斷指標(biāo)或者預(yù)后評(píng)估指標(biāo)。簡(jiǎn)單易行的高通量檢測(cè)方法可以用于大規(guī)模人群的流行病學(xué)研究找到端粒相關(guān)疾病,提供不同端粒長(zhǎng)度分布的更精確的檢測(cè)方法可以用于尋找端粒長(zhǎng)度與相關(guān)疾病之間的可能機(jī)制;當(dāng)然,既高通量又精確又可提供多方面信息的端粒檢測(cè)方法更應(yīng)成為我們研究的目標(biāo)。


 

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